Қозғалмалы фаза қанның сұйық фазасына тең, және пайдалану кезінде назар аудару керек әртүрлі нәрселер бар. Олардың арасында назар аудару керек кейбір «тұңқырлар» бар.
01. Органикалық еріткіш қосқаннан кейін жылжымалы фазаның рН-ын өлшеңіз
Егер сіз рН-ны органикалық қоспамен өлшесеңіз, сіз алатын рН органикалық еріткіш қосқанға дейінгіден басқаша болады. Дегенмен, ең бастысы - жүйелілік. Органикалық еріткішті қосқаннан кейін әрқашан рН өлшейтін болсаңыз, басқалар да сол әдісті қолдануы үшін қолданатын әдіс бойынша қадамдарыңызды көрсетіңіз. Бұл әдіс 100% дәл емес, бірақ кем дегенде әдісті дәйектілікпен сақтайды. Бұл дәл рН мәнін алудан маңыздырақ болуы мүмкін.
02. Буфер пайдаланылмайды
Буфердің мақсаты рН деңгейін бақылау және оның өзгеруіне жол бермеу. Көптеген басқа әдістер жылжымалы фазаның рН мәнін өзгертеді, бұл ұстау уақытының, шың пішінінің және ең жоғары жауаптың жылжуын тудыруы мүмкін.
Құмырсқа қышқылы, TFA және т.б буфер емес
03. Қалыпты рН диапазонында буферді пайдаланбау
Әрбір буфердің 2 рН бірлік диапазонының ені бар, оның шегінде ол ең жақсы рН тұрақтылығын қамтамасыз етеді. Бұл терезеден тыс буферлер рН өзгерістеріне тиімді қарсылықты қамтамасыз етпейді. Буферді дұрыс ауқымда пайдаланыңыз немесе сізге қажет рН ауқымын қамтитын буферді таңдаңыз.
04. Органикалық ерітіндіге буфер қосыңыз
Буферлік ерітіндіні органикалық фазамен араластыру буфердің тұнбаға түсуіне әкелуі мүмкін. Көптеген жағдайларда, тіпті жауын-шашын болса да, оны анықтау қиын. Сулы фазаға әрқашан органикалық ерітінді қосуды ұмытпаңыз, бұл буферлік тұнбаның түсу мүмкіндігін айтарлықтай азайтады.
05. Концентрация градиенті 0%-дан сорғымен араластырыңыз
Бүгінгі таңда қол жетімді сорғылар мобильді фазаларды және газсыздандыруды кірістірілген түрде тиімді араластыра алады, бірақ сіздің әдісіңізді қолданатындардың барлығында жоғары сапалы сорғы болмайды. A және B бір ерітіндіге араластырыңыз және оны 100% кірістірілген түрде іске қосыңыз.
Мысалы, 950 мл органикалық бастапқы қоспаны 50 мл сумен араластыру арқылы дайындауға болады. Мұның артықшылығы HPLC арасындағы өзгермелілікті азайтып, жүйеде көпіршіктер мен жауын-шашынның пайда болу мүмкіндігін азайта алады. Сорғы қоспасының қатынасы 95:5 екенін айта кеткен жөн, бұл бөтелкедегі алдын ала араластырылған ұстау уақыты да 95:5 дегенді білдірмейді.
06. Буферді өзгерту үшін дұрыс өзгертілген қышқылды (негізді) қолданбау
Сіз пайдаланып жатқан буферлік тұзды құрайтын қышқылды немесе негізді ғана пайдаланыңыз. Мысалы, натрий фосфатты буферін тек фосфор қышқылымен немесе натрий гидроксидімен дайындау керек.
07. 5г қосу сияқты әдісте буфер туралы барлық ақпаратты көрсетпеу.1000 мл суға натрий фосфаты.
Буфер түрі буферлеуге болатын рН ауқымын анықтайды. Қажетті концентрация буфердің беріктігін анықтайды. 5 грамм немесе сусыз натрий фосфаты мен 5 грамм натрий фосфаты моногидратының буферлік күші әртүрлі.
08. Тексеру алдында органикалық еріткіштерді қосу
Алдыңғы әдіс B негізгі сызығы үшін буферлік ерітіндіні пайдаланса және сіздің әдісіңіз B негізгі сызығы үшін органикалық ерітіндіні пайдаланса, буферді сорғы түтіктерінде және сорғы басындағы қондыруға болады деп үміттенеміз.
09. Бөтелкені көтеріп, соңғы тамшысын босатыңыз
Бүкіл жүгіруді аяқтау үшін сізде мобильді фазаның жеткіліксіз болуы және үлгіңіз түтінге ұшырауының жақсы мүмкіндігі бар. Сорғы жүйесі мен колоннаның күйіп қалу мүмкіндігінен басқа, жылжымалы фаза толығымен буланып, бөтелкенің жоғарғы жағындағы жылжымалы фаза өзгереді.
10. Ультрадыбыстық газсыздандыру жылжымалы фазасын пайдаланыңыз
Ең маңызды сәт - барлық буферлік тұздардың ерігеніне көз жеткізу, бірақ бұл газсыздандырудың ең нашар жолы және жылжымалы фазаны тез қыздырып, органикалық компоненттердің булануын тудырады. Қажетсіз ақаулықты кейінірек сақтау үшін мобильді фазаны шаңсорғышпен сүзуге бес минут уақыт бөліңіз.
Жіберу уақыты: 27 тамыз 2024 ж