Сұйықтық хроматографиясы арқылы сандық талдаудың принциптері мен әдістері

Сұйық хроматографияның бөліну механизмі қоспадағы компоненттердің екі фазаға сәйкестігінің айырмашылығына негізделген.

Әртүрлі стационарлық фазаларға сәйкес сұйық хроматография сұйық-қатты хроматография, сұйық-сұйық хроматография және байланысқан фазалық хроматография болып бөлінеді.Толтырғыш ретінде кремний гелі бар сұйық-қатты хроматография және матрица ретінде микрокремний қосындысымен байланыстырылған фазалық хроматография кеңінен қолданылады.

Стационарлық фаза формасы бойынша сұйық хроматографияны колонна хроматографиясы, қағаз хроматографиясы және жұқа қабат хроматографиясы деп бөлуге болады.Адсорбциялық қабілеті бойынша оны адсорбциялық хроматография, бөлу хроматографиясы, ион алмасу хроматографиясы және гельді өткізгіш хроматография деп бөлуге болады.

Соңғы жылдары бөлу әсерін жақсарту үшін жылжымалы фазаның жоғары қысыммен жылдам ағуын қамтамасыз ету үшін сұйық колонна хроматографиясы жүйесіне жоғары қысымды сұйықтық ағыны жүйесі қосылды, сондықтан жоғары тиімділік (жоғары қысым деп те аталады) сұйық хроматография. пайда болды.

БӨЛІМ
01 Сұйықтық хроматографиясының сандық талдауының принципі

Сапа негізінде сандық анықтау үшін стандарт ретінде таза заттар қажет;

Сұйық хроматография сандық анықтау салыстырмалы сандық әдіс: яғни қоспадағы талданатын заттың мөлшері таза стандартты үлгінің белгілі мөлшерінен есептеледі.

БӨЛІМ
02 Сұйық хроматография арқылы сандық анықтаудың негізі

Өлшенетін компоненттің мөлшері (Вт) жауап мәніне (A) пропорционал (ең жоғары биіктік немесе шың ауданы), W=f×A.

Сандық түзету коэффициенті (f): Бұл сандық есептеу формуласының пропорционалдылық константасы, ал оның физикалық мағынасы – бірлік жауап мәнімен (шың ауданы) көрсетілген өлшенетін компоненттің шамасы.

Сандық түзету коэффициентін стандартты үлгінің белгілі мөлшерінен және оның жауап мәнінен алуға болады.

Белгісіз компоненттің жауап мәнін өлшеңіз, ал компоненттің мөлшерін сандық түзету коэффициенті арқылы алуға болады.

БӨЛІМ
03 Сандық талдаудағы жалпы терминдер

Үлгі (үлгі): хроматографиялық талдау үшін талданатын заты бар ерітінді.Стандартты және белгісіз үлгілерге бөлінеді.

Стандарт: Белгілі концентрациясы бар таза өнім.Белгісіз үлгі (белгісіз): концентрациясы сыналатын қоспа.

Үлгі салмағы: Сыналатын үлгінің бастапқы салмағы.

Сұйылту: белгісіз үлгінің сұйылту коэффициенті.

Құрамдас бөлік: сандық талдауға жататын хроматографиялық шың, яғни құрамы белгісіз талданатын зат.

Компоненттің мөлшері (мөлшері): сыналатын заттың құрамы (немесе концентрациясы).

Тұтастығы: Хроматографиялық шыңның шыңының ауданын компьютер арқылы өлшеудің есептеу процесі.

Калибрлеу қисығы: талданатын заттың белгісіз құрамын анықтау үшін пайдаланылатын стандартты заттың белгілі мөлшеріне байланысты құрамдас мазмұнының жауап мәніне қарсы сызықтық қисығы.

БӨЛІМ
04 Сұйықтық хроматографиясының сандық талдауы

1. Сандық талдау үшін қолайлы хроматографиялық әдісті таңдаңыз:

l Анықталған компоненттің шыңын растаңыз және 1,5-тен жоғары ажыратымдылыққа (R) қол жеткізіңіз

l Сыналған компоненттердің хроматографиялық шыңдарының консистенциясын (тазалығын) анықтаңыз

l Әдістің анықтау шегі мен сандық шегін анықтау;сезімталдық және сызықтық диапазон

2. Әртүрлі концентрациялардың стандартты үлгілерімен калибрлеу қисығын құрыңыз

3. Сандық әдістердің дәлдігі мен дәлдігін тексеру

4. Үлгі жинауды, деректерді өңдеуді және есеп нәтижелерін жүзеге асыру үшін сәйкес хроматографияны басқару бағдарламалық құралын пайдаланыңыз

БӨЛІМ
05 Сандық шыңдарды анықтау (сапалық)

Сандық анықталатын әрбір хроматографиялық шыңды сапалы түрде анықтаңыз

Біріншіден, сандық анықталатын хроматографиялық шыңның ұстау уақытын (Rt) анықтау үшін стандартты үлгіні пайдаланыңыз.Ұстау уақытын салыстыру арқылы белгісіз үлгідегі әрбір хроматографиялық шыңға сәйкес компонентті табыңыз.Хроматографиялық сапалық әдіс ұстау уақытын стандартты үлгімен салыстыру болып табылады.Критерий жеткіліксізқосымша растау (сапалық)

1. Стандартты қосу әдісі

2. Бір уақытта басқа әдістерді қолданыңыз: басқа хроматографиялық әдістер (механизмді өзгерту, мысалы: әртүрлі хроматографиялық бағандарды пайдалану), басқа детекторлар (PDA: спектрді салыстыру, спектрлік кітапхананы іздеу; МС: массалық спектрді талдау, спектрлік кітапхананы іздеу)

3. Басқа құралдар мен әдістер

БӨЛІМ
06 Сандық шыңның консистенциясын растау

Хроматографиялық ең жоғары консистенцияны (тазалық) растаңыз

Әрбір хроматографиялық шыңның астында бір ғана өлшенген компонент бар екеніне көз жеткізіңіз

Бірлесіп кететін заттардың (қоспалардың) кедергісін тексеру

Хроматографиялық шыңның консистенциясын (тазалығын) растау әдістері

Фотодиодтық матрицалық (PDA) детекторларымен спектрограммаларды салыстыру

Ең жоғары тазалықты анықтау

2996 Тазалық бұрыш теориясы

07-БӨЛІМде жиі қолданылатын сандық әдістер

Стандартты қисық әдіс сыртқы стандартты әдіс және ішкі стандартты әдіс болып бөлінеді:

1. Сыртқы стандартты әдіс: сұйық хроматографияда көп қолданылады

Белгілі концентрациялардың стандартты үлгілерінің сериясы стандартты үлгілер ретінде сыналатын қосылыстардың таза үлгілерін пайдалана отырып дайындалды.бағанға оның жауап мәніне (ең жоғары аумақ) дейін енгізіледі.
Белгілі бір диапазон ішінде стандартты үлгінің концентрациясы мен жауап мәні арасында жақсы сызықтық байланыс бар, атап айтқанда W= f×A , және стандартты қисық жасалады.

Дәл сол эксперименттік жағдайларда өлшенетін компоненттің жауап мәнін алу үшін белгісіз үлгіні енгізіңіз.Белгілі f коэффициенті бойынша өлшенетін компоненттің концентрациясын алуға болады.

Сыртқы стандартты әдістің артықшылықтары:қарапайым операция және есептеу, бұл жиі қолданылатын сандық әдіс;әрбір компонентті анықтау және элюциялау қажет емес;стандартты үлгі қажет;стандартты үлгі мен белгісіз үлгіні өлшеу шарттары сәйкес болуы керек;инъекция көлемі дәл болуы керек.

Сыртқы стандартты әдістің кемшіліктері:Тәжірибе жағдайлары жоғары болуы талап етіледі, мысалы, детектордың сезімталдығы, ағынның жылдамдығы және жылжымалы фазаның құрамын өзгертуге болмайды;әрбір инъекцияның көлемі жақсы қайталану мүмкіндігіне ие болуы керек.

2. Ішкі стандартты әдіс: дәл, бірақ қиындық тудыратын, стандартты әдістерде жиі қолданылады

Аралас эталон жасау үшін стандартқа ішкі эталонның белгілі мөлшері қосылады және белгілі концентрациядағы жұмыс эталондарының сериясы дайындалады.Аралас эталондағы эталонның ішкі эталонға молярлық қатынасы өзгеріссіз қалады.Хроматографиялық бағанға енгізіңіз және жауап мәні ретінде (стандартты үлгі шыңының ауданы/ішкі стандартты үлгі шыңының ауданы) алыңыз.Жауап мәні мен жұмыс эталонының концентрациясы арасындағы сызықтық қатынасқа сәйкес, атап айтқанда W= f×A , стандартты қисық жасалады.

Ішкі стандарттың белгілі мөлшері белгісіз үлгіге қосылады және өлшенетін компоненттің жауап мәнін алу үшін бағанға енгізіледі.Белгілі f коэффициенті бойынша өлшенетін компоненттің концентрациясын алуға болады.

Ішкі стандартты әдістің сипаттамалары:Операция кезінде үлгі мен ішкі эталон араласады және хроматографиялық колоннаға енгізіледі, сондықтан аралас ерітіндідегі өлшенетін компонент мөлшерінің ішкі эталонға қатынасы тұрақты болғанша үлгі көлемінің өзгеруі сандық нәтижелерге әсер етпейді..Ішкі стандартты әдіс үлгі көлемінің, тіпті жылжымалы фазаның және детектордың әсерін өтейді, сондықтан сыртқы стандартты әдіске қарағанда дәлірек.

БӨЛІМ
08 Сандық талдау нәтижелеріне әсер ететін факторлар

Нашар дәлдік келесі себептерге байланысты болуы мүмкін:

Пик аймағының дұрыс емес интеграциясы, үлгіні дайындау кезінде енгізілген сынаманың ыдырауы немесе қоспалар, сынама құтысының мөрленбегені, үлгінің немесе еріткіштің ұшпалануы, үлгіні дұрыс дайындау, үлгіні енгізу мәселелері, дұрыс емес ішкі стандартты дайындау

Нашар дәлдіктің мүмкін себептері:

Қате ең жоғары интеграция, инъекция немесе инжектор мәселелері, үлгінің ыдырауы немесе үлгіні дайындау кезінде енгізілген қоспалар, хроматографиялық мәселелер, нашарлаған детектор реакциясы